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技術文章

thermo賽默飛NanoDropOne超微量光度計檢測功能

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NanoDrop One是一款功能強大、操作簡便的微體積樣品分析儀器,它革新了傳統光度計需要比色皿的繁瑣操作,僅需1-2 μL的樣品即可完成快速、準確的測量。它集成了多種檢測模式于一身,是分子生物學實驗室得力工具。以下是其核心的檢測功能:


一、賽默飛NanoDrop One 核酸定量

1、檢測類型:雙鏈DNA (dsDNA), 單鏈DNA (ssDNA), RNA, 寡核苷酸。

原理:利用核酸在260 nm波長處有吸收峰的特性(根據朗伯-比爾定律)進行定量。

2、關鍵指標:

濃度:直接給出樣品濃度(ng/μL)。

純度:通過計算吸光度比值來評估樣品純度:

A260/A280比值:用于評估蛋白質污染。理想值:~1.8 (DNA), ~2.0 (RNA)。比值偏低表明可能存在蛋白質污染。

A260/A230比值:用于評估鹽類、胍鹽、EDTA或碳水化合物等污染。理想值通常 >2.0。比值偏低表明存在有機溶劑或鹽類殘留。

3、優勢:無需稀釋,直接測量原始樣品,快速(數秒出結果),節省珍貴樣品。


二、賽默飛紫外-可見全光譜掃描

NanoDrop One可以生成190nm至840nm的完整光譜圖,這對于樣品鑒定和純度評估至關重要。

應用:

1、鑒定未知樣品:通過光譜形狀判斷是核酸、蛋白還是其他化合物。

2、深入評估純度:全光譜可以揭示其他污染物(如苯酚、胍鹽)的特征吸收峰,這些是260/280和260/230比值無法全面反映的。

3、檢測顆粒物散射:光譜基線抬升通常意味著樣品中存在不溶性顆粒或氣泡。


三、蛋白質定量

NanoDrop One內置了多種常用的蛋白質定量方法(A280模式)。

1、檢測原理:

A280直接檢測:利用蛋白質中的色氨酸 (Trp) 和酪氨酸 (Tyr) 在280 nm處的吸收來定量。該方法需要已知消光系數。

比色法方法:儀器內置標準曲線,可用于:

微BCA法 (Micro BCA):靈敏度高,抗去垢劑干擾能力強。

Bradford法:快速,但易受去垢劑干擾。

2、優勢:與核酸一樣,僅需微量樣品即可快速獲得濃度結果(mg/mL)。


四、賽默飛熒光定量

這是一個可選配的功能模塊,大幅擴展了NanoDrop One的應用范圍,特別是對低濃度樣品的檢測。

1、原理:使用特定的熒光染料,通過激發光激發染料發出熒光,檢測熒光強度來定量,其靈敏度比紫外吸收法高幾個數量級。

2、應用:

超低濃度核酸定量:如使用Quant-iT™ dsDNA HS 或 RNA HS assays,可檢測低至 pg/μL 級別的核酸,適用于下一代測序 (NGS) 文庫質檢、單細胞分析等。

特異性檢測:某些染料只對特定類型的核酸(如雙鏈DNA)有強熒光信號,特異性更好。


五、賽默飛NanoDrop One的突出特點:

1、智能化與自動化:配備觸摸屏和智能軟件,可自動選擇光程、保存光譜數據、生成報告。

2、樣品留存:測量后的樣品可以回收,用于下游實驗。

3、快速高效:每個樣品測量僅需幾秒鐘,無需清洗比色皿,極大提升了工作效率。


總而言之,賽默飛NanoDrop One不僅僅是一臺核酸濃度儀,它是一個功能高度集成的微體積全光譜分析平臺,能夠滿足現代生命科學實驗室對樣品質量控制的多樣化需求。

TEL:18016231680

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