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技術(shù)文章

賽默飛2720PCR儀的平臺效應(yīng)是什么?

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    賽默飛2720PCR儀是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術(shù),它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的特點,是能將微量的DNA大幅增加。
 
    賽默飛2720PCR儀可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱之為梯度PCR儀。不同的DNA片段其適合的退火溫度不同,通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的適合退火溫度進行有效的擴增。
 
    梯度PCR儀主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣既節(jié)約時間,也節(jié)約成本。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當做普通的PCR用。梯度PCR儀多應(yīng)用于科研、教學機構(gòu)等。
 
    其PCR擴增原理和普通PCR擴增原理相同,在PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴增。擴增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統(tǒng),得出量化的實時結(jié)果輸出。
 
    PCR擴增過程后期會出現(xiàn)的產(chǎn)物的積累按減弱的指數(shù)速率增長的現(xiàn)象。原因:底物和引物的濃度已經(jīng)降低,dNTP和DNA聚合酶的穩(wěn)定性或活性降低,產(chǎn)生的焦磷酸會出現(xiàn)末端產(chǎn)物抑制作用,非特異性產(chǎn)物或引物的二聚體出現(xiàn)非特異性競爭作用,擴增產(chǎn)物自身復性,高濃度擴增產(chǎn)物變性不干凈。
 
    PCR反應(yīng)體系的配置方式有時也會影響反應(yīng)的正常進行。常規(guī)方法與其它酶學反應(yīng)一樣,再加入DNA聚合酶。早期的PCR儀沒有帶加熱的蓋子,要求在反應(yīng)液上覆蓋一層礦物油,防止水分蒸發(fā)。

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